Isolasi DNA dari kultur sel
Bahan 1. Buffer lysis 50 mM Tris HCL pH 8 100 mM EDTA 100 mM NaCl 1% SDS 2. TE 1X 10 mM Tris HCl 1 mM EDTA 3. Phenol: CIAA (Phenol Chloroform Isoamil Alkohol) (25:24:1) Phenol 25 mL Chloroform 24 mL Isoamil Alkohol 1 mL 4. Proteinase K 20 mg ml 5. Na acetat 2,5 M pH 5,0 Cara kerja: 1, sel hasil kultur (1x10 pangkat 5 sel) dipanen tambahkan 700uL buffer lisis dalam tabung 1,5 mL vortek sentrifuge 5' --> buang supernatan 2. tambahkan 10 ul proteinase K (20 mg/mL) 3. Inkubasikan 55 C selama 2 jam 4. ekstraksi menggunakan fenol-CIAA goyang menggunakan shaker selama 30 menit 5. Sentfrifus kecepatan 12.000 rpm selama 15 menit 6. Supernatan DNA dipindahkan ke tabung 1,5 mL yang baru (hitung volumnya), tambahkan isopropanolol dingin (1:1) atau dengan menambahkan Naacetat 2,5 M pH 5,0 (0,1 x volume supernatan DNA) dan ethanol absolut 2-2,5 kali volume supernatan DNA. bolak balikkan pelan pelan untuk melihat terbentuknya benang DNA 7. apabila benang-bengan DNA t...