PCR untuk mengamplifikasi exon 13 gena RET
amplifikasi gena dengan PCR menurut metode Ceccherini et al, 1994 primer forward: 5'-CTC TCT GTC TGA ACT TGG GC-3' primer reverse: 5'-TCA CCC TGC AGC TGG CCT TA-3' menghasilkan PCR product sepanjgan 238 basepair Reaction mix: 1. PCR buffer 10 x : 2,5 uL 2. MgCl2 50 mM : 0,5 uL 3. dNTPs 25 mM : 0,2 uL 4. Tag Pol 5 u/uL : 0,2 uL 5. Primer Forward: 1 uL 6. Primer Reverse: 1 uL 7. DNA template: 1 uL 8. dH2O : 18,6 uL Total: 25 uL atau dengan 2x PCR master mix 1. PCR master mix: 15 uL 2. Primer Forward: 1 uL 3. Primer Reverse: 1 uL 4. DNA template: 2 uL 5. dH2O : 11 uL Total: 30 uL 2x PCR mix terdiri dari 1. Taq polymerase 50 unit/ml 2. 2 x PCR buffer 3. dNTPs 200 uM 4. MgCl2 3 mM PCR condition 96 derajat celsius : 5' 84 C: 30" 60 C : 45" 72 C : 1' sikus 35 x dilanjutkan 72 C : 5' 15 C: ~ preparasi sebaiknya diatas es Endonuklease Restriksi Pemotongan produk PCR dengan enzim endonukleasi restriksi TaqI....